Primera vacuna chilena para virus ISA
29 de junio de 2009
El laboratorio Centrovet, lanza la primera vacuna recombinante nacional para combatir el virus ISA. La vacuna estará disponible en el mercado a partir de junio de 2009, y se dispondrá del orden de 60 millones de dosis para este año.
El virus ISA, causal de la actual crisis del salmón en Chile, ha sido objeto de estudios y discusiones para tratar de combatirlo, prueba de ello es el acabado estudio que realizó el laboratorio chileno Centrovet para crear la primera vacuna chilena para ISAv. Se trata de una vacuna desarrollada con ingeniería genética donde trabajaron expertos profesionales.
La vacuna se anunció en Puerto Varas, junto a una charla técnica denominada “Vacuna subunitaria contra la anemia infecciosa del salmón, desarrollo, experiencias y proyecciones” dictada por Jaime Tobar, director del departamento de investigación y desarrollo de Centrovet, quien expuso sobre el camino que los llevó finalmente a la formulación de la vacuna.
Tobar se refirió a las características del virus, perteneciente a la familia Orthomyxoviridae y su semejanza con el virus de la influenza, donde hizo especial mención a la proteína Hemaglutinina (HA) que en el caso de ISA puede tener una superficie de 10 nm de longitud y en el caso de la Influenza, una superficie de 15 nm. Además, expresó que la envoltura lipídica del virus cubre su estructura (de entre 100-130 nm de diámetro) y que su genoma está compuesto por ocho RNA de cadena simple negativa.
Las Hemaglutininas–Esterasas (HE), son proteínas glicosiladas que forman las espículas del virión y que se adhieren a la célula del huésped; poseen una transmembrana compuesta por 224 aminoácidos externos, 20 aminoácidos transmembrana y 22 aminoácidos internos. El experto explicó que la región variable se da en HE de diferentes largos de tallos, tanto en el genotipo europeo como americano.
Parte importante del desarrollo de la vacuna consistió en generar proteínas similares a las que presenta el virus normalmente, evaluando entre otros parámetros la estructura proteica. La determinación de la conformación nativa de las proteínas de ISA, fue evaluada a través de citometría de flujo, en el laboratorio Centrovet, donde se basaron en que “si el antígeno se ensambla en forma correcta, habrá un reconocimiento que se traducirá en un aumento en la intensidad de fluorescencia medida por el equipo, detectándose así proteínas correctamente ensambladas”, indicó Tobar. El equipo del laboratorio Centrovet, advirtió así, que las proteínas totales se expresan en la conformación adecuada, abriendo la posibilidad de prescindir de una estructura que los mantenga.
Respecto a la transmisión, el experto explicó que existen hospederos susceptibles como salmón del Atlántico, salmón chinook, trucha marrón, salmón coho, trucha arco iris, argumentando que estos tres últimos no manifiestan la sintomatología clínica de la infección. Además, Tobar indicó que la transmisión puede ser tanto horizontal (de pez a pez), a través de la sangre, contenido intestinal, orina y mucosa epidérmica del salmón infectado, como vertical (de padre a hijo) y por vectores como el caligus. Los peces enfermos se caracterizan por presentar anemia con un hematocrito menor a 10%, palidez de branquias y corazón, además presentan congestión de bazo, hígado e intestino y pequeños derrames vasculares en vísceras e intestino.
Variabilidad del virus ISA y su relación con la eficacia de la vacuna.
¿Existe un rol del HPR (zona altamente polimórfica) en la patogenicidad y protección frente al virus? Esta fue la pregunta que planteó el Dr. Tobar, sobre lo cual explicó que se han reportado correlaciones entre la patogenicidad y tres hallazgos puntuales:
1.- El largo del tallo de la proteína HE
2.- La presencia de 352FNT354 en los HPR
3.- La presencia del sitio de la glicosilación 349 NQT 351 en los HPR
A modo de ejemplo, indicó que la hemaglutinina larga (HPR0) es de baja virulencia comparada con la hemaglutinina corta (HPR7b) que es de alta virulencia.
Respecto al aislamiento del virus, realizado en el laboratorio de Centrovet, pudieron observar que los aislados del virus eran capaces de infectar, además de las células SHK-1, comúnmente usadas, a las células CHSE-214, fenómeno poco común entre aislados mundiales.
Por otro lado, indicó que la región HPR podría no ser el único blanco de los anticuerpos neutralizantes, sugiriendo entonces que la vacuna podría entregar un grado de protección cruzada importante. Adicionalmente, la vacuna produce anticuerpos neutralizantes y la evidencia que estas moléculas participan en la protección viral ha sido publicada previamente. Sin embargo, si la vacuna entrega o no protección cruzada contra otras variantes HPR del virus se confirmará “en la medida que los datos epidemiológicos de las vacunaciones en terreno lo permitan”, puntualizó el experto.
Otras estrategias de control de ISAv
Además de los estudios orientados a la generación de la vacuna, se mostraron estudios orientados al control del virus mediante desinfectantes. Estudios previos indican que el virus se encuentra estable en muestras de tejido mantenidas en hielo. por seis días, en agua de mar a 10ºC por dos días y que es inactivada por cloroformo, en pH menor a cuatro por más de 8 horas, pH 12 por más de 24 horas, a una temperatura de 56ºC por 5 min., en 50 ppm de NaOCl por 5 min., en 100 ppm NaOCl en 15 min.
Respecto a la inactivación del virus, el especialista enumeró productos cuyos principios activos son: amonios cuaternarios, glutaraldehídos, oxidantes inorgánicos (estabilizados), bronopol y cloraminas.
En relación a lo anterior, se mostraron los resultados de inactivación de ISA con productos actualmente comercializados por el laboratorio. Estos estudios, se realizaron en condiciones de laboratorio altamente similares a las de terreno, utilizando tiempos de exposición cortos (no superiores a los 30 segundos), materia orgánica y agua de mar. Los resultados de la investigación mostraron alta eficacia en neutralizarlo.
Producto
Principio activo
Dilución
Cress 50%
Bronopol
1:10000
Carsept 50%
Amonio cuaternario bromado
1: 2000
Bixler
Amonios cuaternarios + Glutaraldehído
1:500
Climber 20%
Glutaraldehído
1:200
IPN Killer
Oxidantes inorgánicos estabilizados
2,5 g/L
Virokiller
Cloramina T
12 mg/L (12 g/1000 L)
Estudios de eficacia y seguridad de la vacuna
Los estudios de eficacia indicaron que en peces no vacunados la mortalidad acumulada podría llegar al 80%, sin embargo en peces vacunados, la mortalidad acumulada giraba en torno al 15%.
“La estrategia de la vacuna contra ISAv, se basó en la generación de proteínas recombinantes similares a las que presenta el virus, donde se utilizaron levaduras transformadas con construcciones portadoras de los genes virales, de tal forma que puedan sintetizar en forma independiente las proteínas recombinantes”, puntualizó Tobar. Quien indicó además que “la vacuna es inocua para el pez donde se observan efectos adversos que no comprometen la calidad productiva de los peces en cosecha” y que “esta vacuna junto con un seguimiento estricto de la normativa sanitaria, ayudará a reducir pérdidas asociadas a la enfermedad”.
Respecto a las proyecciones de la vacuna, se espera lanzar próximamente las versiones combinadas con los otros antígenos que el laboratorio ya tiene a disposición (SRS, IPN, Vibrio ordalii y Aeromonas salmonicida), como una vacuna quíntuple. Adicionalmente, se están realizando los estudios destinados a encapsular los antígenos recombinantes en la plataforma oral MicroMatrix, componente de la vacuna oral SRS ya registrada por la empresa.
Finalmente, podemos indicar que es la primera vacuna registrada en Chile contra esta patología, y es la primera vacuna nacional realizada con tecnología de DNA recombinante. Ambos hitos, considerando la vacuna oral SRS significan un gran avance para Chile, para la industria farmacéutica veterinaria y una importante ayuda para la industria salmonera nacional.
Características de la Vacuna
Es una vacuna recombinante subunitaria, compuesta por dos proteínas expresadas en un sistema heterólogo (levadura común). La utilización de levaduras transformadas, con construcciones portadoras de los genes virales, fabrican eficientemente las dos proteínas recombinantes.
La vacuna es una emulsión inyectable, donde cada dosis contiene proteínas recombinantes, a una concentración de 5,4 a 8,1 ug, posee un adyuvante oleoso no mineral y formaldehído como agente inactivante. Ayuda a la prevención del ISAv en Salmo salar (pre-smolt) que pueden ser vacunados intraperitonealmente con un peso no menor a 30 gr., en dosis de 0.1 ml/Pez. Se recomienda que la temperatura del agua oscile entre los 10 a 13ºC y que los peces estén debidamente anestesiados al momento de la aplicación del producto.
Fuente: Mundoacuícola.com
